幽門螺桿菌碳14檢測即碳-14呼氣試驗，碳-14呼氣試驗通常需要連續呼氣2-3分鐘。碳-14呼氣試驗的主要原理是基于幽門螺桿菌中含有的尿素酶的特性，在檢測時使患者服用碳-14以標記尿素，如果患者存在幽門螺桿菌感染，患者體內的尿素酶便可以將碳-14標記尿素分解，生成氨和碳-14標記的二氧化碳。碳-14標記的二氧化碳經過呼吸系統排出體外，通過集氣裝置將其收集并進行分析，便可以判斷患者體內是否存在幽門螺桿菌。
碳-14呼氣試驗之前，患者需要禁食、禁飲3小時左右，然后口服碳-14尿素膠囊后等待25分鐘左右再進行檢測。碳-14呼氣試驗是使患者通過輸液管進行呼氣，輸液管與集氣瓶相連，患者在呼氣過程中要保持力度適中，可以進行換氣，需要一直呼氣，直到集氣瓶中液體的顏色由粉色變為無色，患者可停止吹氣，通常呼氣時間約為2-3分鐘。
患者在碳-14呼氣試驗前的15分鐘內嚴禁劇烈活動，以防止機體產生乳酸而使血液中的pH值出現變數，影響檢驗結果，同時患者應在碳-14呼氣試驗前漱口，以免口腔中含有細菌而污染集氣裝置，從而影響試驗的精準性。