性激素六項檢查，包括雌二醇、孕酮、睪酮、卵泡刺激素、黃體生成素以及泌乳素。性激素六項查看黃體功能不足，一般根據性激素六項中的孕酮判斷，患者需在月經前進行抽血檢查。
黃體功能正常時，在排卵后產生大量的孕酮，當黃體功能不足時體內孕酮水平隨之下降。患者觀察黃體功能，可在月經前的第5、7、9天進行性激素六項檢查，根據平均值評估黃體酮功能，若患者孕酮值＜10-15ng/mL，提示黃體功能不足。黃體功能不足的患者，通常會出現月經周期縮短，兩次月經來臨第1天之間間隔短于21天，還可出現月經前后淋漓出血，經期延長。
懷孕的患者如果既往有流產史、陰道出血、腹痛等癥狀，通常需給予檢查HCG、孕酮，評估黃體功能。如果患者孕酮＜25ng/ml，說明黃體功能不足，可能存在受精卵著床不穩、流產、宮外孕的風險。此外，黃體功能還可通過基礎體溫監測，如果在排卵后體溫升高的持續時間短于11天，提示黃體功能不足，可遵醫囑補充黃體酮，如口服黃體酮膠丸。