硝酸甘油的主要作用是擴張血管，主要是用于冠心病、心絞痛的治療和預防，還能夠降低血壓或治療充血性心力衰竭。硝酸甘油有溶液、注射液、片劑和氣霧劑等藥型，使用略有差別。
硝酸甘油溶液和硝酸甘油片主要治療冠心病導致的心絞痛，能夠降低血壓，治療充血性心力衰竭。硝酸甘油注射液主要是在手術過程中能夠迅速控制高血壓，另外在心臟血管手術中或術后，可以用來控制心肌缺血，對于不穩定的心絞痛，如果含服硝酸甘油片無效時可以用注射液治療。硝酸甘油氣霧劑主要預防心絞痛，特別適合心絞痛發作時的急救。使用硝酸甘油制成的藥物后可能會出現一些不良反應，用藥后會出現血管擴張性頭痛，也會出現眩暈、虛弱、心悸等體位性低血壓的表現，還可能會有暈厥、面紅、口干、藥疹以及剝脫性皮炎，偶爾會出現心動過緩、心絞痛加重和暈厥，有的表現為口腔黏膜發麻。
硝酸甘油存在禁忌證，如果患者正處于一些疾病的急性發作期，比如急性循環衰竭、青光眼，嚴重低血壓等情況不能使用，嚴重的肝腎功能損害者不能使用。在用藥的時候應該要注意使用能有效緩解急性心絞痛的最小劑量，用藥以后應該要取坐位，避免頭暈摔傷。建議在醫生指導下用藥，不可盲目自行用藥，以免出現不良影響。