多數情況下早孕試紙會在懷孕后的1-4周加深到強陽，不過由于每個孕婦身體體質、經期是否規律等方面存在差異，因此無法給出更為準確的時間，詳細情況應以醫生給出的為準。
精子、卵子結合后，會變成受精卵，之后胎盤細胞會生成人絨毛膜促性腺激素，此激素會大量聚集于孕婦的尿液內，早孕試紙利用人絨毛膜促性腺激素膠體金法進行篩查，若經檢測后顯示為陽性，通常能初步判斷女性懷孕。
女性在剛剛懷孕時，身體中的人絨毛膜促性腺激素量并不是很多，一般會呈現弱陽性，隨著時間的延長，該激素含量變多，早孕試紙也會呈強陽性。若自身經期規律，大概28-30天來一次月經，此時早孕試紙通常會在懷孕后1-4周加深至強陽。不過有些孕婦因受到經期紊亂、宮外孕或胚胎發育不良等因素的影響，常會干擾到激素分泌，可使得人絨毛膜促性腺激素升高得不是很明顯，檢測結果變為強陽的時間可能會相應變長。
使用早孕試紙檢測前應避免喝過多的水，建議使用晨尿，有利于提高結果的準確性。若想要明確是否懷孕，除了使用早孕試紙，還可到醫院婦產科就診，通過血HCG、B超等檢驗項目明確診斷。