青霉素G抗菌譜主要包括大多數革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陽性桿菌、革蘭氏陰性球菌等。青霉素G是第一個應用于臨床的抗菌藥物，對于多種敏感菌所致的感染性疾病有治療作用：
1、革蘭氏陽性球菌：除葡萄球菌外，青霉素G對溶血性鏈球菌、肺炎球菌、草綠色鏈球菌、敏感金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等多種革蘭式陽性球菌均具有較強的治療作用；
2、革蘭氏陽性桿菌：包括白喉棒狀桿菌、炭疽桿菌、產氣莢膜梭菌、破傷風梭菌、乳酸桿菌等也可使用青霉素G藥物進行治療；
3、革蘭氏陰性球菌：包括腦膜炎奈瑟菌、敏感淋病奈瑟菌等也屬于青霉素G的適用范圍；
4、革蘭氏陰性桿菌：青霉素G還可用于治療少部分革蘭氏陰性桿菌，包括流感桿菌、百日咳鮑特菌等；
5、其他：梅毒螺旋體、鉤端螺旋體、回歸熱螺旋體、牛放線桿菌等螺旋體或者放線桿菌也屬于青霉素G抗菌譜范圍內。
青霉素G為注射或者靜脈滴注用藥，常被作為上述各種細菌感染的首選藥物，但是部分患者用藥后會發生貧血、皮疹、藥疹等不良反應，因此患者明確病因后需遵醫囑用藥治療。